美利体育登录入口官网

方法概述

本标准规定了食品中维生素K1的两种测定方法：第一法为高效液相色谱-荧光美利体育登录入口官网法（HPLC-FLD），第二法为液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）。两种方法均适用于各类配方食品、植物油、水果和蔬菜中维生素K1的测定。

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第一法：高效液相色谱-荧光美利体育登录入口官网法

美利体育登录入口官网:原理

婴幼儿食品、乳品和植物油等样品经脂肪酶和淀粉酶酶解后，用正己烷提取维生素K1，通过C18液相色谱柱分离，锌柱柱后还原，荧光美利体育登录入口官网器美利体育登录入口官网。水果、蔬菜等低脂样品用异丙醇-正己烷提。行匝趸林换蟛舛。

美利体育登录入口官网:仪器与试剂

仪器名称	规格要求
高效液相色谱仪	带荧光美利体育登录入口官网器
离心机	转速≥6000r/min
旋转蒸发仪	配套真空系统
氮吹仪	可控温氮吹装置

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美利体育登录入口官网:操作步骤

试样制备

粉状样品混匀后直接取样；片状、颗粒状样品粉碎后备用；液态样品摇匀后取样；果蔬样品取可食部分洗净匀浆后备用。

试样处理（避光操作）

婴幼儿食品、乳品、植物油：

1. 准确称取1-5g样品于50mL离心管中
2. 加入5mL温水溶解，加入磷酸盐缓冲液5mL
3. 加入0.2g脂肪酶和0.2g淀粉酶，涡旋混匀
4. 37℃水浴振荡酶解2小时以上
5. 加入10mL乙醇和1g碳酸钾，再加入10mL正己烷提取
6. 离心分离，收集上清液
7. 重复提取一次，合并提取液
8. 旋转蒸发至干，甲醇定容至5mL
9. 0.22μm滤膜过滤，待测

水果、蔬菜样品：

1. 准确称取1-5g匀浆样品于50mL离心管中
2. 加入5mL异丙醇，涡旋1min，超声5min
3. 加入10mL正己烷，涡旋提取3min
4. 离心分离，收集上清液
5. 重复提取一次，合并提取液
6. 氮吹至干，正己烷溶解
7. 中性氧化铝柱净化
8. 氮吹至干，甲醇定容至5mL
9. 0.22μm滤膜过滤，待测

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美利体育登录入口官网:色谱条件

参数	设置
色谱柱	C18柱(250mm×4.6mm,5μm)
锌还原柱	50mm×4.6mm
流动相	甲醇-四氢呋喃-冰乙酸(900:100:0.3)
流速	1.0mL/min
美利体育登录入口官网波长	Ex=243nm, Em=430nm
进样量	10μL

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第二法：液相色谱-串联质谱法

美利体育登录入口官网:原理

样品经酶解提取后，用C18液相色谱柱分离维生素K1，串联质谱美利体育登录入口官网，采用同位素内标法进行定量分析。

美利体育登录入口官网:仪器与试剂

仪器名称	规格要求
液相色谱-质谱联用仪	带电喷雾离子源(ESI)
分析天平	感量0.1mg
超声波振荡器	频率40kHz

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美利体育登录入口官网:操作步骤

试样处理

基本操作同第一法，但需加入同位素内标维生素K1-D7使用液0.25mL，提取液定容至25mL后取5mL净化。

美利体育登录入口官网:色谱质谱条件

参数	设置
色谱柱	C18柱(50mm×2.1mm,1.8μm)
流动相	甲醇(含0.025%甲酸+2.5mmol/L甲酸铵)
流速	0.3mL/min
柱温	30℃
进样量	5μL
电离方式	ESI+

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结果计算

试样中维生素K1含量按下式计算：

X = (ρ × V? × V? × 100) / (m × V? × 1000)

式中：X-试样中维生素K1含量(μg/100g)；ρ-试样溶液中维生素K1浓度(ng/mL)；V?-提取液总体积(mL)；V?-分取提取液体积(mL)；V?-定容体积(mL)；m-试样质量(g)

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方法性能指标

样品类型	检出限(LOD)	定量限(LOQ)
婴幼儿食品、乳品、植物油	1.5μg/100g	5μg/100g
果蔬样品	1.5μg/100g	5μg/100g

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注意事项

1. 整个操作过程需避光进行，避免维生素K1光解
2. 酶解温度和时间需严格控制，确保酶解完全
3. 锌柱使用前需排干管路中的水分
4. 标准溶液需定期校正浓度
5. 方法验证需进行空白试验和加标回收试验