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美利体育登录入口官网:赖脯胰岛素
说明
本品概说分子式C25HRNsOS
分子量5807.57
本品系由含有可高效表达赖脯胰岛素基因的.工程化细胞，经发酵、分离、高度纯化、结晶和干燥制成的原料药，赖脯胰岛素为 28^8·1-赖氨酸-29L-脯氨酸-人胰岛素，在结构上将人胰岛素B链第28位脯氨酸和第29位赖氨酸互换，形成Lys（Bze）、Pro（B）。按干燥品计算，每1mg含赖脯胰岛素应不低于27.0单位。
每1单位赖脯胰岛素相当于0.0347mg。
基本要求
制品基本要求生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具等应符合“凡例”的有关要求，
制造
生产工艺2.1工程细胞
工程菌菌种名称、来源及种子批检定应符合批准的要求。
2.2原料
2.2.1种子液制备
将检定合格的工作种子批细胞接种于适宜的培养基（可含适量抗生素）中培养。
2.2.2发酵用培养基
采用适宜的不含抗生索的培养基。
2.2.3种子液接种及发酵培养
2.2.3.1在灭菌培养基中接种适最种子液。
2.2.3.2在适宜的温度下进行发酵，应根据经批准的发酵工艺进行，并确定相应的发酵条件、如温度、pH值、溶解氧、补料、发酵时间等。如系大肠埃希菌表达，发酵液应定期进行质粒丢失率检查（通则3406）。
2.2.4发酵液处理
用适宜的方法收集，处理细胞。
2.2.5初步纯化及高度纯化
采用经批准的纯化工艺进行初步纯化和高度纯化，使其纯度达到规定的要求。
2.2.6过滤、结晶及干燥
经初步纯化动高度纯化后，采用经批准的结晶工艺及干燥工艺对纯化收集物进行除菌过滤、结晶和干燥，干燥品即为赖脯胰岛素原料药。
2.2.7分批
应符合生物制品分包装及贮运管理（通则0239）规定。
2.2.8包装
应符合牛物制品分包装及贮运管理（通则0239）规定和批准的内容。
检定
质量检定本品为白色或类白色粉末。
在含最测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
取本品适量，用0.1%三氟乙酸溶液制成每lml中含10mg的溶液，取20pl，加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液（pH7.3）98μl、0.1%V：酶溶液4μl与水78μl，混匀，置37℃水浴中2小时后，加85%磷酸3ul，作为供试品溶液；另取赖脯胰岛素对照品适量，同法制备，作为对照品溶液。照含骨测定项下的方法，以0.2mol/L硫酸盐缓冲液（pH2.3）-乙晴（90：10）为流动相∧，乙腈-水（50：50）为流动相B，按下表进行梯度洗脱。
时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）
u 90 10
5 80 20
45 40 6
5 10 60
取对照品溶液和供试品溶液各25μl，分别注入液相 色谱仪，记录色谱图，片段Ⅱ与片段Ⅲ两峰之间的分离度 不小于3.4，片段Ⅱ峰与片段Ⅲ峰的拖尾因子均不得过 1.5。供试品溶液的肽图谱应与对照品溶液的肽图谱一致。
取本品适量，加0.01mol/1.盐酸溶液溶解并制成每1ml中含3.5mg的溶液，作为供试品溶液。取供试品溶液适，室温放置，使 A_{::} 脱酰胺赖脯胰岛素含量为(.8%～11.0％：作为系统适用性试验溶液。照含量测定项下的色谱条件，以0.2mol/L硫酸盐缓冲液（pH2.3）-乙腈（82：18）为流动相A，乙腈-水（50：50）为流动相B，按下表进行梯度洗脱。
时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）
0 81 19
60 81 19
83 51 49
84 81 19
取系统适用性试验溶液 20μ| 注人液相色谱仪，记录色谱图，调节流动相比例使赖脯胰岛素主峰的保留时间约为41分钟， A_{2}: 脱酰胺赖脯胰岛素峰的保留时间在线性梯度开始之前。赖脯胰岛素主峰和 A_{21} 脱酰胺赖脯胰岛紫峰之间的分离度应不小于2.5，拖尾因子应不火于2.0。另取供试品溶液20μl注人液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积归一化法计算， A_{s1} 脱酰胺赖脯胰岛素峰不得过1.00%，其他任何单个杂质峰不得过0.50%，其他杂质蜂面积之和（不包括 A_{im} 脱酰胺赖脯胰岛素）不得大于2.00%。
取本品适量，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并制成每1ml中约含4.0mg的溶液，作为供试品溶液。照分子排阻色谱法（通则0514）测定。以亲水改性硅胶为填充剂(5～10μm)；以冰醋酸-乙晴-0.1%精氨酸溶液（15：20：65）为流动相，流速为每分钟0.5ml；美利体育登录入口官网波长为276nm。取赖脯胰岛素适量，室温放置10～20天，使高分子蛋白质含量不小于0.4%（或取人胰岛素单体-二聚体对照品适量），用0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中约含4mg的溶液：取100μl注人液相色谱仪，赖脯胰岛素单体-二聚体（或人胰岛素单体-二聚体）的分离度应符合要求。取供试品溶液100μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，扣除保留时间大于赖脯胰岛素峰的其他峰，按面积归一化法计算，保留时间小于赖脯胰岛素峰的所有峰面积之和不得大于0.25%。
精密称取本品适量，加0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含锌0.4～0.8μg的溶液，摇匀。另精密量取锌单元素标准溶液适量，用0.01mol/L盐酸溶液分别稀释成每1ml 中锌含量为0.2μg、0.4ug、0.6μg、0.8μg和1.0μg的锌标准溶液。照原子吸收分光光度法（通则0406第--法），在213.9nm的波长处测定吸光度。按干燥品计，锌含量应为0.3～0.6%。
取本品0.20g：105℃干燥至恒重，依法检查（通则0831），减失重量不得过10.0%。
取本品0.20g，依法检查（通则0841），以干燥品计，遗留残渣不得过2.5%。
取本品0.30g，依法检查（通则1105），每1g供试品中需氧菌总数不得过100CFU。
取本品，依法检查（通则1143），每1mg赖脯胰岛素中含内毒素的量应小于10EU。
取本品适量，依法检查（通则3412或通则3414）.或采用经批准的方法检查，每1mg赖脯胰岛素中宿主蛋白质残留量不得过10ng。
取本品适量，依法检查（通则3407），或采用经批准的方法检查，每1.5mg赖脯胰岛素中宿主DNA残留量不得过10ng。
如种子液制备及后续生产使用了抗生素，依法检查（通则3408)，或采用经批准的方法检查，不应有残余氨苄西林或其他抗生素活性，
至少每年测定1次。取本品适量，依法检查（通则1211)，取血时间30分钟，每组的实验动物数可减半，实验采用随机设计，照生物检定统计法（通则1431）中量反应平行线测定随机设计法计算效价，每1mg赖脯胰岛素的效价不得少于15单位。
至少每年测定1次。取本品，用氨基酸序列美利体育登录入口官网或其他适宜的方法测定。
A链N末端15个氨基酸序列：
Gly-Ile- Val-Glu-Gln-Cys-Cys-ThrSer-Ile-Cys-Ser-Leu-Tyr-Gln:
B链N末端15个氨基酸序列：
Phe- Val-Asn-Gln-His-Leu-Cys-Gly-Ser-His-Leu- Val-Glu-Ala-Leu。
工艺中如有单链前体，应采用经验证并批准的方法及限度进行控制，
照高效液相色谱法（通则0512）测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（3um），以0.2mol/L硫酸盐缓冲液（取无水硫酸钠28.4g，加水800ml，溶解后，用85%磷酸调节pH值至2.3，加水至1000ml，过滤）-乙腈（74：26，或其他适宜比例）为流动相；流速为每分钟1.0ml；柱温40℃；美利体育登录入口官网波长为214nm。取系统适用性试验溶液（取赖脯胰岛素对照品适量，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并制成每1ml中含lmg的溶液，室温放置，使 A_{21} 脱酰胺赖脯胰岛素含量为0.8%～11.0%） 20μ]，注入液相色谱仪.调节流动相比例，使赖脯胰岛素主峰保留时间约为20 分钟，赖脯胰岛素主峰与 A_{I1} 脱酰胺赖脯胰岛素峰之间的分离度应不小于3.0，主蜂拖尾因子应不大于1.5，主峰峰面积的RSD（n≥3）不得过1.1%，
测定法取本品适量，精密称定，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并定母稀释制成每1ml中约含20单位的溶液（临用新制)，精密量取20ul，注人液相色增仪，记录色谱图；另取赖脯胰岛素对照品适最，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。
保存、运输及有效期
储存 · 运输 · 效期避光，密闭，在-15℃及以下保存和运输、自生产之日起，按批准的有效期执行：
图谱
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