勘
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中国药典2025年版三部
品种正文第二部分
序号 135
美利体育登录入口官网:贝伐珠单抗注射液
拼音 Beifazhu Dankang Zhusheye · 英文 Bevacizumab Injection
说明
本品概说重链EVQLVESGGG LVQPGGSLRI. SCAASG YTFT NYGMNWVRQA 40 PGKGLEWVGW INTYTGEPTY AADFKRRFTF SLDTSKSTAY 80 LQMNSLRAED TAVYYCAKYP 1IYYGSSHWYF DVWGQGTLVT 120 VSSASTKGPS VFPLAPSSKS TSGGTAALGC LVKDYFPEPV 160 TVSWNSGALT SGVHTFPAVL QSSGLYSLSS VVTVPSSSLG 200 TQTYICNVNH KPSNTKVDKK VEPKSCDKTH TCPPCPAPEL 240 LGGPSVFLFP PKPKDTLMIS RTPEVTCVVV DVSHEDPEVK 280 FNWYVDGVEV HNAKTKPREE QYNSTYRVVS VLTVLHQDWL 320 NGKEYKCKVS NKALPAPIEK TISKAKGQPR EPQVYTLPPS 360 REEMTKNQVS LTCLVKGFYP SDIAVEW ESN GQPENNYKTT 100 PPVLDSDGSF FLYSKLTVDK SRWQQGNVFS (SVMHEALHN 440 HYTQKSLSIS PGK 453## 轻链DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCSA SQDIS NYLNWYQQKP 40 GKAPKVLIYF TSSLHSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP 80 EDFATYYCQQ YSTVPWTFGQ GTK VEIKRTV AAPSVFIFPP 120 SDEQLKSGI'A SVVCLLNNFY PREAK VQWKV DNALQSGNSQ 160 ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG 200 LSSPVTKSFN RGEC 214## 二硫键$$\begin{array} { r l r } { 2 2 ^ { n } { } ^ { } - 9 6 ^ { n ^ { \prime } } } & { { } 1 5 0 ^ { n ^ { \prime \prime } } { } - 2 0 6 ^ { n ^ { \prime \prime } } } & { 2 6 7 ^ { n } { } \cdot 3 2 7 ^ { n } } & { { } 3 7 3 ^ { n ^ { \prime \prime } } 4 3 1 ^ { n } } \end{array}$$轻链链内23'-88'134'-194'N-糖基化位点303：303"分子式 $\mathrm { C } _ { 3 5 3 \times } \mathrm { H } _ { 9 9 9 4 } \mathrm { . V } _ { 1 7 1 6 } \mathrm { O } _ { 5 0 2 9 } \mathrm { S } _ { 4 4 }$ （不含糖基部分）分子量146564.49（不含糖基部分）本品系由含有可高效表达贝伐珠单抗基因的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞，经细胞培养、分离和高度纯化后获得的贝伐珠单抗的无菌溶液。不含抑菌剂和抗生素。
基本要求
制品基本要求1基本要求 生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
制造
生产工艺2制造 ## 2.1T程细胞 ## 2.1.1名称及来源 贝伐珠单抗工程细胞株系由含抗血管内皮生长因子人源化单克隆抗体基因的质粒转染中国仓鼠卵巢（CHO）细胞构建而成， ## 2.1.2细胞库建立、传代及保存 原始细胞传代、扩增后保存于液氮或一130℃以下，作为主细胞库。从主细胞库经细胞传代、扩增后保存于液氮或一130℃以下，作为工作细胞库。各级细胞库细胞传代不得超过批准的代次，细胞库检定合格后方可用于生产。 ## 2.1.3主细胞库及工作细胞库的检定 应符合生物制品生产用动物细胞基质制备及质量控制（通则0234）规定。 ## 2.2原液 ## 2.2.1细胞的复苏与扩增 从工作细胞库来源的细胞复苏后，进行传代、扩增，供生物反应器接种用。 ## 2.2.2生产用细胞培养液 生产用细胞培养液不得含任何血清和抗生素。 ## 2.2.3细胞培养 采用经批准二艺进行细胞培养，收集含目的产物的培 养液，即“收获液"。细胞培养全过程应严格按照无菌 操作. ## 2.2.4分离纯化 收获液采用经批准的工艺进行纯化、病毒清除并调整至目标浓度，过滤，即为贝伐珠单抗原液．如需存放，应规定保存温度和时间。 ## 2.2.5原液检定 按3.1项进行。 2.3成品 ## 2.3.1分批 应符合生物制品分包装及贮运管理（通则0239）项下有关规定。 ## 2.3.2分装 应符合生物制品分包装及贮运管理（通则0239）与注射剂（通则0102）项下有关规定。 ## 2.3.3规格 同批准的规格. ## 2.3.4包装 应符合生物制品分包装及贮运管理（通则0239）与注射剂（通则0102）项下有关规定， ## 2.3.5成品检定 按3.2项进行。
检定
质量检定3检定 各项目中如涉及到贝伐珠单抗的质量，均以贝伐珠单抗蛋白质部分计， ## 3.1原液检定 3.1.1鉴别 3.1.1.1肽图照肽图检查法（通则3405）测定。 试液（1）变性溶液取盐酸胍7.64g：加水适量使溶解并稀释至10ml，摇匀，取二硫苏糖醇1.50g，加水使溶解并稀释至10ml：摇匀。取盐酸胍溶液1ml、二硫苏糖醇溶液10μl和三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH8.0）S0μl，混匀。 （2）碘乙酰胺溶液取碘乙酰胺1.80g，加水使溶解并稀释至10ml。 （3）赖氨酸内切酶溶液（Lys-C酶溶液）取Lys-C酶1支（约相当于200单位），自上而下缓慢加50mmol/L醋酸溶液40μl至容器底部，振摇使溶解。 供试品溶液取本品适量（约相当于贝伐珠单抗0.8mg)，置离心机中，37℃C减压离心浓缩至内容物为透明状，加变性溶液40μl，涡旋使蛋白质溶解。37℃水浴1小时后短暂离心，放冷，加碘乙酰胺溶液1μl，混匀后再次短暂离心，避光放置30分钟，加三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH8.0）760μl，混匀。取上述溶液100μl，加赖氨酸内切酶溶液5μl，混匀，37℃水浴4小时。加甲酸3μl终止反应，16200g离心5分钟，取上清液。 对照品溶液取贝伐珠单抗对照品适量（约相当于贝伐珠单抗0.8mg)，照供试品溶液同法制备。 色谱条件以耐酸的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（2.1mm×150mm，1.7μm），柱温为60℃；以含0.1%甲酸的0.02%三氟乙酸水溶液为流动相A，含0.08%甲酸的0.02%三氟乙酸乙崩溶液为流动相B，按下表进行梯度洗脱，流速为每分钟0.3ml；美利体育登录入口官网波长为214nm；样品盘温度为6℃；进样体积10μl。 时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）098259821206535120.101001280100128.1982135982 测定法取对照品溶液和供试品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图， 结果判定供试品溶液的肽图谱应与对照品溶液的肽图谱一致。 ## 3.1.1.2等电点 照单抗电荷变异体测定法（通则3129第一法）测定。 系统适用性溶液、空白溶液、系统适用性要求见通则3129第一法项下。 结果判定供试品溶液图谱应与对照品溶液图谱一 致，供试品溶液主峰等电点和对照品溶液主峰等电点差 异不得大于0.2。 ## 3.1.2检查 3.1.2.1颜色 取本品，按照批准的方法测定，应符合批准的要求。 ## 3.1.2.2澄清度 取本品，依法检查（通则0902），与3号浊度标准液 比较，不得更浓. ## 3.1.2.3 pH值 取本品，依法检查（通则0631)，应符合批准的要求。 ## 3.1.2.4渗透压摩尔浓度 取本品，依法检查（通则0632），应符合批准的要求。 ## 3.1.2.5纯度与杂质 ## （1）分子排阻色谱法 照高效液相色谱法（通则0512）测定。 供试品溶液1取供试品：30℃孵育24小时。当供试品浓度高于25mg/ml，用空白溶液稀释制成每1ml约含贝伐珠单抗25mg的溶液： 供试品溶液2取供试品，用流动相将供试品稀释至每1ml约含贝伐珠单抗0.5mg的溶液，30℃孵育24小时， 对照品溶液取贝伐珠单抗对照品：分别按供试品溶液1和供试品溶液2同法制备。 空白溶液按照配方配制不含贝伐珠单抗的溶液，分别照供试品溶液1和供试品溶液2同法制备。 色谱条件以适合分离分子质量为10～500kD蛋白质的亲水改性硅胶为填充剂的色谱柱（7.8mm×300mm，5μm)，柱温为23°℃；流动相为含0.25mol/L氯化钾的0.20mol/L磷酸钾缓冲液（pH6.2)；流速为每分钟0.5ml；美利体育登录入口官网波长为280nm；样品盘温度为30℃。 系统适用性要求空白溶液图谱应无目标峰干扰。对照品溶液色谱图中，贝伐珠单抗峰的保留时间约为17.0分钟，主峰相邻的相对保留时间为0.65～0.85的峰视为聚体峰，两峰之间的分离度不得低于1.5。前5针和末次对照品主峰保留时间的RSD不得高于3.0%．主峰面积的RSD不得高于3.0%。 测定法分别取供试品溶液110μl和供试品溶液2100μl，注人液相色谱仪，记录色谱图至贝伐珠单抗峰保留时间的2倍。按面积归一化法计算贝伐珠单抗和聚体的含徽。 限度供试品溶液2中贝伐珠单抗含量不得低于 95%，供试品溶液1中聚体含量不得高于10%， ## （2）离子交换色谱法 照高效液相色谱法（通则0512）测定。 供试品溶液取供试品，用流动相A稀释制成每1ml约含贝伐珠单抗1mg的溶液、取lml：加lmg/ml羧肽酶B溶液10μl，混匀，37℃水浴20分钟。 对照品溶液取贝伐珠单抗对照品，照供试品溶液项下同法制备。 空白溶液按照制剂配方配制但不含贝伐珠单抗的溶液，照供试品溶液同法制备。 色谱条件以羧酸基为固定相的弱阳离子交换色谱柱（4mm×250mm，10μm），柱温为40℃；以 20mmol/LN-氨基甲酰甲基乙磺酸（ACES）溶液（pH6.50±0.05）
图谱
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