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1 试验目的与范围

本试验旨在通过标准化方法评价罐内水性涂料抵抗微生物侵染的能力，确保涂料在储存期间的质量稳定性。适用于各类水性涂料的抗微生物性能测试，其他类型涂料可参考本标准。

2 试验原理

模拟自然界微生物生长环境，在涂料样品中加入特定微生物菌种，置于30℃±2℃条件下培养，通过定期美利体育登录入口官网微生物数量变化来评价涂料的抗微生物侵染功效。

3 试验美利体育官网首页网址与材料

4 试验菌种准备

美利体育登录入口官网:4.1 试验菌种清单

美利体育登录入口官网:4.2 菌悬液制备

细菌菌悬液制备：分别接种四种细菌于营养琼脂斜面，35℃±1℃培养24-48小时，用灭菌生理盐水洗出菌苔，稀释至1.0×10?-9.0×10? CFU/mL，等体积混合备用。

酵母菌悬液制备：接种酵母菌于PDA斜面，28℃±1℃培养48-72小时，用灭菌生理盐水洗下菌苔，稀释至1.0×10?-9.0×10? CFU/mL备用。

5 试验方法

美利体育登录入口官网:5.1 涂布培养法

5.1.1 试样接种：称取20g样品2份，分别接种1mL细菌菌悬液和1mL酵母菌悬液，充分混合，30℃±2℃保存，分别于0时、第3天、第5天、第7天美利体育登录入口官网微生物含量。

5.1.2 微生物美利体育登录入口官网：使用无菌棉签蘸取样品，在TSA平板（细菌）和PDA平板（酵母菌）表面涂布，重复3次。TSA平板36℃±1℃培养24-48小时，PDA平板28℃±1℃培养48-72小时。

5.1.3 菌落计数：记录平板菌落数，计算平均值，以CFU表示。

5.1.4 结果评价：按微生物菌落总数进行分级评价：

美利体育登录入口官网:5.2 稀释培养法

5.2.1 试样接种：取100g样品2份，分别接种1mL混合细菌液和1mL酵母菌悬液，充分混合，30℃±2℃保存，分别于0时、第3天、第7天、第14天、第21天和第28天美利体育登录入口官网微生物含量。

5.2.2 微生物美利体育登录入口官网：取10g样品加入90mL稀释液，制成1:10稀释液，依次进行10倍递增稀释。每个稀释度做两个平皿，细菌用TSA培养基36℃±1℃培养24-48小时，酵母菌用PDA培养基28℃±1℃培养48-72小时。

5.2.3 结果计算：微生物减少百分率=（N?-N?）/N?×100%，其中N?为初始接种量，N?为不同时间微生物含量。

5.2.4 结果评价：按第7天微生物减少百分率进行分级：

6 培养基配制

美利体育登录入口官网:6.1 营养琼脂培养基(NA)

蛋白胨10.0g、牛肉膏5.0g、氯化钠5.0g、琼脂15.0g，加蒸馏水至1000mL，pH 7.2-7.4，121℃高压灭菌20分钟。

美利体育登录入口官网:6.2 马铃薯葡萄糖培养基(PDA)

马铃薯300.0g、葡萄糖20.0g、琼脂20.0g，加蒸馏水至1000mL，121℃高压灭菌20分钟。

美利体育登录入口官网:6.3 胰酪胨大豆琼脂(TSA)

胰酪蛋白胨15.0g、大豆蛋白胨5.0g、氯化钠5.0g、卵磷脂1.0g、吐温80 7.0g、琼脂15.0g，加蒸馏水至1000mL，pH 7.3±0.2，121℃高压灭菌20分钟。

7 试验报告

试验报告应包含：样品描述、试验菌种名称及浓度、试验方法、抗微生物侵染评价等级、试验人员和日期、接种次数、偏离标准差异等完整信息。

8 安全注意事项

操作人员应具备正规实验室工作经验，严格遵守生物安全操作规程，在II级生物安全柜中进行微生物操作，确保实验环境安全。