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美利体育登录入口官网:qPCR引物探针纯度如何评估？Biozen Oligo给出方案

2026-06-12

在寡核苷酸的应用市场中，诊断行业增长迅速。从核酸美利体育登录入口官网相关产品和服务的市场规模来看，PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应）美利体育登录入口官网占据核酸美利体育登录入口官网的主导地位，并呈现递增态势，这主要得益于qPCR（实时荧光定量PCR）这一主流技术的发展。qPCR凭借其灵敏、快速和实时定量的特性，已成为分子诊断、病原体美利体育登录入口官网及基因表达分析的关键技术之一。


荧光探针法qPCR是临床美利体育登录入口官网中最常用的美利体育登录入口官网方法，试剂盒中通常包含一对正反向引物及特异性荧光探针。在PCR循环的退火-延伸阶段，引物与模板DNA结合，探针定位于目标序列区域，在延伸过程中通过荧光信号实时反映扩增过程。


引物和探针均为固相合成的单链寡核苷酸，长度通常为18–30个碱基。根据GB/T 34797—2017标准，可采用质谱法或高效液相色谱法进行纯度美利体育登录入口官网。本文基于Biozen Oligo色谱柱，构建了一套离子对-反相液相色谱（IP-RPLC）方法，实现多种qPCR引物和探针的高效纯度分析。

亮点


Biozen Oligo色谱柱依托核-壳颗粒技术与宽pH稳定性，适于寡核苷酸分析


峰形尖锐对称，分离表现优异


同时适用于多组qPCR引物与荧光探针的纯度评估


TEA-HFIP体系兼顾分离度与质谱兼容性


方法通用性强，适合IVD质量控制场景


实验部分


3.1 样品信息

注：1，2，3代表三种模板基因，F为正向引物，R为反向引物，P为荧光探针



3.2 色谱条件

  • 色谱柱：Biozen Oligo（2.1 × 100 mm, 1.7 μm, 100 ?）；P/N: 00D-4791-AN

  • 流动相：

    A：100 mM 六氟异丙醇+ 15 mM 三乙胺

    B：甲醇

  • 流速：0.25 mL/min

  • 美利体育登录入口官网波长：260 nm

  • 柱温：50 ℃

  • 进样量：1 μL（50 nmol）


结果

所有引物以及探针图谱参见图1-9。

图1. 1-F谱图（右图为局部放大）

图2. 1-R谱图（右图为局部放大）

图3. 1-P谱图（右图为局部放大）

图4. 2-F谱图（右图为局部放大）

图5. 2-R谱图（右图为局部放大）

图6. 2-P谱图（右图为局部放大）

图7. 3-F谱图（右图为局部放大）

图8. 3-R谱图（右图为局部放大）

图9. 3-P谱图（右图为局部放大）


引物、探针纯度分析结果


结论

本文使用Biozen Oligo（2.1 × 100 mm，1.7 μm，100 ?）对qPCR引物和探针进行质量评估。通过保留时间很好的区分引物的差异，结合纯度的结果快速识别引物的质量。该方法通用性强，可满足多种引物和探针的纯度美利体育登录入口官网需求。采用TEA-HFIP体系作为流动相，不仅具有优异的灵敏度和分离度，同时兼具质谱兼容性，便于后续进行分子量测定等定性分析。


如果您在引物/探针分析方法开发或优化过程中遇到挑战，欢迎联系飞诺美技术支持团队，我们将为您提供专业的应用支持与解决方案。


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