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美利体育登录入口官网:金培生长激素注射液
拼音 JinPei Shengzhangjisu Zhusheye · 英文 Givopegsomatropin Solution Injection
说明
本品概说本品系由大肠埃希菌表达、制备的人生长激素与甲氧基聚乙二醇衍生物（40kD）进行偶联反应并经分离纯化获得的聚乙二醇单位点修饰人生长激素，即金培生长激素，制成的无菌溶液，可含有适宜的稳定剂、渗透压调节剂和抑菌剂等。不含抗生素。
基本要求
制品基本要求生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
制造
生产工艺2.1 生产用主要原材料及辅料
2.1.1 人生长激素：人生长激素应符合注射用人生长激素 2.1～2.2 项下的规定。
2.1.2 甲氧基聚乙二醇衍生物：甲氧基聚乙二醇衍生物应符合批准的要求。
2.2 原液
2.2.1 偶联：采用经批准的工艺进行偶联，偶联效率应达到规定的要求。
2.2.2 纯化：采用经批准的工艺进行纯化并过滤，即为金培生长激素原液。如需存放，应规定温度和时间。
2.2.3 原液检定：按 3.1 项进行。
2.3 半成品
2.3.1 配制与除菌：按经批准的处方配制稀释液：配制后应立即用于稀释，将原液用稀释液稀释至所需浓度并过滤，即为半成品，可保存于适宜的温度。
2.3.2 半成品检定：按 3.2 项进行。
2.4 成品
2.4.1 分批：应符合生物制品分包装及贮运管理（通则 0239）规定。
2.4.2 分装：应符合生物制品分包装及贮运管理（通则 0239）与注射剂（通则 0102）有关规定。
2.4.3 规格：同批准的规格。
2.4.4 包装：应符合生物制品分包装及贮运管理（通则 0239）与注射剂（通则 0102）有关规定。
检定
质量检定取本品，用水稀释制成每 1ml 中约含金培生长激素 0.5mg 的溶液
照紫外 - 可见分光光度法（通则 0401）在 230～360nm 波长范围内测定，在 277nm 的波长处有最大吸收。
取本品适量，用水稀释制成每 1ml 中约含金培生长激素 1mg 的溶液，取 90μl，加两性电解质 10μl 和甲基红试液 2μl，混匀。
取金培生长激素标准品 90μl（约相当于含金培生长激素 90μg），加两性电解质 10μl 和甲基红试液 2μl，混匀。
取供试品溶液和对照品溶液各 10μl、适宜的等电点标准品 5μl，加至上样孔，依法测定，记录电泳图。
供试品主区带等电点应为 4.7～5.7；供试品溶液的电泳图谱应与对照品溶液的电泳图谱一致。
(1) 胰蛋白酶溶液：取经甲苯磺酰苯丙氨酰氯甲酮（TPCK）处理的胰蛋白酶适量，用 1mol/L 醋酸钠缓冲液（pH5.0）制成每 1ml 中含胰蛋白酶 1mg 的溶液。(2) 三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲液：取三羟甲基氨基甲烷 12.11g 和氯化钙 0.29g，加水 400ml 使溶解，用 5mol/L 醋酸溶液调节 pH 值至 8.5，加水至 500ml，混匀。
取金培生长激素标准品 150μl（约相当于含金培生长激素 150μg），加等体积的 Tris 缓冲液和胰蛋白酶溶液 10μl，混匀，置 37℃4 小时，加冰醋酸 60μl，混匀。
取本品，用水稀释成每 1ml 中约含金培生长激素 1mg 的溶液，取 150μl，照对照品溶液同法制备。
以耐酸的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），柱温为 40℃；以 0.1% 三氟醋酸水溶液为流动相 A，0.1% 三氟醋酸乙腈溶液为流动相 B，按下表进行梯度洗脱，流速为每分钟 1.0ml；美利体育登录入口官网波长为 214nm；进样体积 100μl。
对照品溶液色谱图中，特征肽段出峰顺序依次为 P1、P2、P3、P4、P5、P6；与肽段 P4 峰保留时间（约为 62 分钟）相比，P1、P2、P3、P5 和 P6 的相对保留时间分别约为 0.36、0.41、0.42、1.26 和 1.59；P1 峰与 P2 峰之间的分离度应不小于 9.0，P2 峰与 P3 峰之间的分离度应不小于 2.0。
供试品溶液的肽图谱应与对照品溶液的肽图谱一致（图 1）。
取本品适量，经脱盐处理，采用基质辅助激光解析飞行时间质谱仪或其他适宜质谱仪，照质谱法（通则 0431）测定金培生长激素分子量。
应为 5.58×10^3～6.82×10^3。
取本品适量，加水稀释制成每 1ml 中含金培生长激素 0.2mg 的溶液，取适量，与还原型供试品缓冲液（4×）按 3:1 体积比混匀，水浴加热 5 分钟。
取金培生长激素标准品适量，分别加水稀释制成每 1ml 中含金培生长激素 0.2mg、0.05mg、0.004mg 的溶液，分别取上述各浓度溶液与还原型供试品缓冲液（4×）按 3:1 体积比混匀，水浴加热 5 分钟。
每 1ml 含金培生长激素 0.004mg 的对照品溶液。
分离胶浓度为 7%，浓缩胶浓度为 4.5%。
分子量标准品溶液和对照品溶液所得电泳图谱分别应符合通则 0541 第五法 4.2.1(1) 和 4.3.1 中的要求；灵敏度溶液主带应能显色。
分别取分子量标准品溶液 10μl、对照品溶液、灵敏度溶液和供试品溶液各 20μl 上样，电泳，考马斯亮蓝染色，凝胶成像仪扫描，获得电泳图谱。按面积归一化法计算供试品中金培生长激素含量。
应不低于 95.0%。
见 3.1.4。
见 3.1.4。
见 3.1.4。
在 3.1.4 项下记录的供试品溶液色谱图中，保留时间大于人生长激素峰的色谱峰忽略不计，按面积归一化法计算金培生长激素的含量。
应不低于 95.0%。
取本品，用水稀释制成每 1ml 中约含金培生长激素 1mg 的溶液。
取金培生长激素标准品，用水稀释制成每 1ml 中约含金培生长激素 1mg 的溶液，取适量，与 0.1mol/L 碳酸氢氨缓冲液（用氨水调 pH 值至 9.0）按 5:1（V/V）混匀。
取对照品溶液适量，50℃水浴 5 小时，0.45μm 滤膜过滤。
取人生长激素标准品适量，用水制成每 1ml 中约含人生长激素 0.1mg 的溶液。
取多聚乙二醇化人生长激素对照品适量，用水制成每 1ml 中约含 0.5mg 的溶液。
以耐碱的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（4.6mm×250mm，5μm，300?），柱温 50℃；以 0.05mol/L 三羟甲基氨基甲烷溶液（用盐酸调 pH 值至 9.5）为流动相 A，正丙醇为流动相 B，按下表进行梯度洗脱，流速为每分钟 0.5ml；美利体育登录入口官网波长为 220nm；进样体积 20μl。
系统适用性溶液和对照品溶液色谱图中，金培生长激素峰和脱酰胺组分峰均可能显示为 2～3 个未达到基线分离的色谱峰，在主峰前且与主峰相邻的色谱峰视为脱酰胺组分峰；系统适用性溶液图谱（图 2）中此峰簇面积明显大于对照品溶液图谱中相应峰簇面积；系统适用性溶液色谱图中脱酰胺组分峰簇最右侧峰高与该峰和金培生长激素峰之间的谷高之比应不小于 2.0。
取峰定位溶液 1、峰定位溶液 2 和供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液色谱图中，除多聚乙二醇化人生长激素峰、金培生长激素峰和人生长激素峰外，其他峰均视为相关蛋白峰，按面积归一化法计算相关蛋白质含量。
不得过 6.0%。
精密量取本品适量，加水定量稀释制成每 1ml 中含金培生长激素 6.0mg 的溶液。
精密称定聚乙二醇对照品适量，加水溶解并定量稀释制成每 1ml 中约含聚乙二醇 0.15mg 的溶液。
取金培生长激素原液适量，用水制成每 1ml 中含金培生长激素 12.0mg 的溶液，取聚乙二醇对照品适量，加水溶解并制成每 1ml 中含 0.9mg 的溶液，取上述两种溶液等体积混合。
以耐酸的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（3.9mm×150mm，5μm）；以 0.05% 三氟醋酸水溶液为流动相 A，0.05% 三氟醋酸乙腈溶液为流动相 B，按下表进行梯度洗脱，流速为每分钟 1.0ml；蒸发光散射美利体育登录入口官网器，根据仪器型号设置适宜参数；进样体积 10μl。
系统适用性溶液色谱图中，金培生长激素峰与聚乙二醇峰之间的分离度应不小于 1.0。
分别取系统适用性溶液、对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。
供试品溶液的游离聚乙二醇峰面积不得大于对照品溶液的主峰面积（2.5%）。
平均修饰率 = (Mz - M0) / M0 × 100%
Mz 为 3.1.1.4 项下测定得到的分子量；M0 为聚乙二醇分子量，以 40000 计；M0 为生长激素分子量，以 22000 计；N 为理论修饰位点个数，10。
平均修饰率应为 8%～12%。
取 0.2mol/L 醋酸钠溶液 70ml 与 0.2mol/L 醋酸溶液 30ml 加水至 1700ml，用 0.2mol/L 醋酸钠溶液或 0.2mol/L 醋酸溶液调 pH 值至 4.90±0.02，再加入甲醇和乙腈各 150ml。
取 0.2mol/L 醋酸钠溶液 70ml、0.2mol/L 醋酸溶液 30ml 和 70.20g 氯化钠，加水溶解并稀释至 1700ml，用 0.2mol/L 醋酸钠溶液或 0.2mol/L 醋酸溶液调 pH 值至 4.90±0.02，再加入甲醇和乙腈各 150ml。
取本品，用水稀释制成每 1ml 中约含金培生长激素 1mg 的溶液。
取金培生长激素 N 端 Phe 修饰（P1）、140 位 Lys 修饰（P2）、145 位 Lys 修饰（P3）、158 位 Lys 修饰（P4）、38 位 Lys 修饰（P5）位点异构体对照品适量，分别用水超滤离心脱盐并稀释制成每 1ml 约含 0.2mg 的溶液。
取金培生长激素标准品适量，用水超滤离心脱盐并稀释制成每 1ml 约含金培生长激素 1mg 的溶液。
以丙烷磺酸基键合聚甲基丙烯酸基质或聚苯乙烯二乙烯基苯为填充剂的阳离子交换色谱柱（7.5mm×75mm，10μm，1000?或等效色谱柱），柱温为 25℃；按下表梯度洗脱，流速为每分钟 0.4ml；美利体育登录入口官网波长为 214nm；进样体积 10μl。
系统适用性溶液色谱图中，分别与峰定位溶液色谱图中主峰保留时间一致的峰视为位点异构体峰，各位点异构体峰之间的分离度均应不小于 0.6。
取各峰定位溶液、系统适用性溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，按面积归一化法计算各位点异构体的含量。
P1 含量应为 43.6%～55.0%；P2 含量应为 14.3%～25.7%；P3 含量应为 6.8%～11.6%；P4 含量应为 6.6%～11.2%；P5 含量应为 9.1%～16.3%；P2 至 P5 含量之和应为 45.0%～56.4%。
在 3.1.2.2 项下记录的供试品溶液色谱图中，保留时间小于主峰的所有峰均视为高分子蛋白质峰，按面积归一化法计算高分子蛋白质含量，保留时间大于人生长激素峰的色谱峰忽略不计。
不得过 4.0%。
在 3.1.2.2 项下记录的供试品溶液色谱图中，保留时间大于人生长激素峰的色谱峰忽略不计，按面积归一化法计算人生长激素含量。
不得过 1.0%。
依法检查（通则 1143 凝胶限度法）。
每 1mg 金培生长激素中含内毒素的量应小于 5EU。
取本品，分别把本品与金培生长激素标准品用工作培养液稀释制成每 1ml 中约含金培生长激素 1000ng 的溶液，作为系列稀释的起始浓度，依法测定（通则 3537）供试品的生物学活性。
应为标准品的 70%～140%。
磷酸盐缓冲液：取无水磷酸氢二钠 4.11g，二水合磷酸二氢钠 3.27g，加水 950ml 使溶解，加三乙胺 5ml，用磷酸调 pH 值至 7.0，用水稀释至 1000ml，摇匀。
取金培生长激素标准品。
精密量取本品适量，用磷酸盐缓冲液定量稀释制成每 1ml 中约含 1.0mg 的溶液。
取金培生长激素标准品和人生长激素标准品，分别用水制成每 1ml 中约含 1.0mg 的溶液，等体积混合。
以适合分离分子量 10000～500000 球状蛋白的亲水改性硅胶为填充剂的色谱柱（7.8mm×300mm，5μm）；以磷酸盐缓冲液为流动相，流速为每分钟 0.6ml；美利体育登录入口官网波长为 214nm；进样体积 20μl。
系统适用性溶液色谱图中，金培生长激素峰与人生长激素峰之间的分离度应不小于 1.5；高分子蛋白质峰高与其和金培生长激素峰之间谷高之比应不小于 1.7。
分别取系统适用性溶液、对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算金培生长激素含量。
每 1ml 中含金培生长激素应不低于 18.0mg。
依法检查（通则 1143 凝胶限度法）。
每 1mg 金培生长激素中含内毒素的量应小于 5EU。
依法检查（通则 1101 薄膜过滤法）。
应符合规定。
应为无色、澄明液体。
取本品，使用辣根过氧化物酶（HRP）标记的第二抗体，依法测定（通则 3401），应为阳性。
如处方中有苯酚，在 3.3.3.9 项下记录的色谱图中，供试品溶液应有与对照品溶液主峰保留时间一致的色谱峰。
取本品，依法检查（通则 0904 第一法）。
不得检出金属屑、玻璃屑、长度或最大粒径超过 2mm 纤毛和块状物等明显外来的可见异物。
取本品，依法检查（通则 0102）。
应符合规定。
取本品，依法测定（通则 0631）。
应为 5.5～6.5。
取本品，依法测定（通则 0632）。
应符合批准的要求。
取本品，照 3.1.2.3 项下方法测定，供试品溶液色谱图中，苯酚峰忽略不计，除多聚乙二醇化人生长激素峰、金培生长激素峰和人生长激素峰外，其他峰均视为相关蛋白质峰，按面积归一化法计算相关蛋白质含量。
不得过 13.0%。
取本品，照 3.1.2.4 项下方法测定。
供试品溶液的游离聚乙二醇峰面积不得大于对照品溶液的主峰面积（2.5%）。
取本品，照 3.1.2.2 项下方法测定。供试品溶液色谱图中，保留时间大于人生长激素峰的色谱峰忽略不计，保留时间小于主峰的所有峰均视为高分子蛋白质峰，按面积归一化法计算高分子蛋白质含量。
不得过 5.0%。
在 3.3.3.7 项下记录的供试品溶液色谱图中，保留时间大于人生长激素峰的色谱峰忽略不计，按面积归一化法计算人生长激素含量。
不得过 1.0%。
磷酸盐缓冲液：取无水磷酸氢二钠 1.0g，二水合磷酸二氢钠 7.0g，加水溶解并稀释成 1000ml 溶液。
精密称取苯酚对照品适量，加磷酸盐缓冲液使溶解并定量稀释制成每 1ml 中约含苯酚 0.2mg 的溶液。
取本品，精密量取适量，用磷酸盐缓冲液定量稀释制成每 1ml 中约含苯酚 0.2mg 的溶液。
取苯酚适量，加磷酸盐缓冲液溶解并制成每 1ml 中约含 0.4mg 的溶液；取金培生长激素对照品，用磷酸盐缓冲液稀释制成每 1ml 中约含金培生长激素 1.0mg 的溶液；取上述两种溶液等体积混合。
用丁基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），柱温为 40℃；以磷酸盐缓冲液 - 乙腈（9:1）为流动相 A，乙腈为流动相 B，按下表梯度洗脱，流速为每分钟 1.0ml；美利体育登录入口官网波长为 270nm；进样体积 20μl。
苯酚峰与金培生长激素主峰之间的分离度应不小于 3.0。
分别取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算苯酚含量。
本品每 1ml 中含苯酚应为 2.0～2.7mg。
磷酸盐缓冲液：取无水磷酸二氢钠 4.79g，加水使溶解并稀释至 2000ml；取无水磷酸氢二钠 1.42g，加水使溶解并稀释至 500ml；以向前者加入后者的方式调 pH 值至 5.7。
取本品。
精密称取泊洛沙姆 188 对照品适量，加水使溶解并定量稀释制成每 1ml 中分别约含 0.5mg、1.0mg、1.5mg、2.0mg、2.5mg 和 3.0mg 的溶液。
分别取金培生长激素原液和泊洛沙姆 188 适量，用水稀释制成每 1ml 中约含金培生长激素 9.0mg 和泊洛沙姆 188 1.0mg 的溶液。
以亲水改性硅胶为填充剂的分子排阻色谱柱（7.8mm×300mm，5μm），柱温 30℃；以磷酸盐缓冲液为流动相，流速为每分钟 1.0ml；示差折光美利体育登录入口官网器，美利体育登录入口官网温度 30℃；进样体积 10μl。
金培生长激素峰与泊洛沙姆 188 峰之间的分离度应不小于 2.5；对照品溶液线性回归方程的决定系数 R?应不低于 0.998。
分别精密量取对照品溶液、系统适用性溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图至 30 分钟，以对照品溶液浓度对其相应的峰面积计算线性回归方程，由回归方程计算泊洛沙姆 188 的含量。
应为处方量的 80.0%～120.0%。
依法检查（通则 1143 凝胶限度法）。
每 1mg 金培生长激素中含内毒素的量应小于 5EU。
依法检查（通则 1101 薄膜过滤法）。
应符合规定。
依法检查（通则 1141 小鼠试验法），腹腔注射给药。
应符合规定。
取本品与金培生长激素标准品，用工作培养液稀释制成每 1ml 中约含金培生长激素 1000ng 的溶液，作为系列稀释的起始浓度，依法测定（通则 3537）本品生物学活性。
应为标准品的 70%～140%。
取本品，按 3.1.4 项下方法测定。
含金培生长激素应为标示量的 90.0%～110.0%。
保存、运输及有效期
储存 · 运输 · 效期于 2～8℃避光、密闭保存和运输，谨防冻结。自生产之日起有效期 24 个月。
使用说明
临床应用说明应符合生物制品分包装及贮运管理（通则 0239）规定和批准的内容。
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