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分子式 C833H1111O241N214S8 分子量 18765.27 本品系由高效表达牛碱性成纤维细胞生长因子基因的大肠埃希菌、经发酵，分离和高度纯化后获得的牛碱性成纤维细胞生长因子制成。含适宜稳定剂，不含抑菌剂和抗生素。

生产和检定用设施、原材料及辅料、水，器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。

2.1 工程菌菌种

2.1.1 名称及来源

牛碱性成纤维细胞生长因子工程菌株系由带有牛碱性成纤维细胞生长因子基因的重组质粒转化的大肠埃希菌菌株。

2.1.2

种子批的建立

应符合生物制品生产检定用菌毒种管理及质量控制（通则 0233）的规定。

2.1.3

菌种检定

主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。

2.1.3.1 划种 LB 琼脂平板

应呈典型大肠埃希菌集落形态，无其他杂菌生长。

2.1.3.2 染色镜检

应为典型的革兰阴性杆菌。

2.1.3.3 对抗生素的抗性

应与原始菌种相符。

2.1.3.4 电镜检查（工作种子批可免做）

应为典型大肠埃希菌形态，无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。

2.1.3.5 生化反应

应符合大肠埃希菌生化反应特性。

2.1.3.6 牛碱性成纤维细胞生长因子表达量

在摇床中培养，应不低于原始菌种的表达量。

2.1.3.7 质粒检查

该质粒的酶切图谱应与原始重组质粒的图谱一致。

2.1.3.8 目的基因核苷酸序列检查（工作种子批可免做）

目的基因核苷酸序列应与批准的序列一致。

2.2 原液

2.2.1

种子液制备

将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜的培养基（可含适量抗生素）中培养。

2.2.2 发酵用培养基

采用适宜的不含抗生素的培养基。

2.2.3 种子液接种及发酵培养

2.2.3.1 在火函培养基中接种适量种子液。

2.2.3.2 在适宜的温度下进行发酵，应根据经批准的发酵工艺进行，并确定相应的发酵条件，如温度、pH 值、溶解氧、补料、发酵时间等。发酵液应定期进行质粒丢失率检查（通则 3406）

2.2.4 发酵液处理

用适宜的方法收集、处理菌体。

2.2.5 纯化

采用经批准的纯化工艺进行初步纯化和高度纯化·使其达到 3.1 项要求，加人稳定剂，除菌过滤后即为牛碱性成纤维细胞生长因子原液，如需存放，应规定温度和时间，

2.2.6 原液检定

按 3.1 项进行。

2.3 半成品

2.3.1 配制与除菌

按经批准的配方配制稀释液。配制后应立即用于稀释。将原液用稀释液稀释至所需浓度，除菌过滤后即为半成品，保存于 2～8℃。

2.3.2 半成品检定

按 3.2 项进行。

2.4 成品

2.4.1

分批

应符合生物制品分包装及贮运管理（通则 0239）规定，

2.4.2

分装

应符合生物制品分包装及贮运管理（通则 0239）规定。

2.4.3 规格

同批准的规格。

2.4.4 包装

应符合生物制品分包装及贮运管理（通则 0239）规定，

3.1 原液检定

3.1.1 生物学活性

依法测定（通则 3527）。

3.1.2 蛋白质含量

依法测定（通则 0731 第二法）。

3.1.3 比活性

计算生物学活性与蛋白质含量的比值，每 Img 蛋白质应不低于 1.7×10IU。

3.1.4 纯度

3.1.4.1 电泳法

依法测定（通则 0541 第五法)。用非还原型 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶的胶浓度为 15%，加样量应不低于 10μg（考马斯亮蓝 R250 染色法）或 5μg（银染法）。经扫描仪扫描，纯度应不低于 95.0%，

3.1.4.2 高效液相色谱法

依法测定（通则 0512)。色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以 A（三氟乙酸 - 水溶液：量取 1.0ml 三氟乙酸加水至 1000ml，充分混匀）、B（三氟乙酸 - 乙腈溶液：取 1.0ml 三氟乙酸加人色谱纯乙腈至 1000ml，充分混匀）为流动相，在室温条件下，进行梯度洗脱（0～70% 流动相 B)。上样量应不低于 10μg，在波长 280nm 处美利体育登录入口官网，以牛碱性成纤维细胞生长因子色谱蜂计算的理论板数应不低于 2050，按面积归一化法计算，牛碱性成纤维细胞生长因子主峰面积应不低于总面积的 95.0%..

3.1.5

分子量

依法测定（通则 0541 第五法）。用还原型 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶的胶浓度为 15%，加样量应不低于 1.0μg：供试品 2 条蛋白质电泳区带的分子质量应分别为 17.5kD±1.8kD 和 22.0kD±2.2kD。

3.1.6 外源性 DNA 残留量

每 1 支/瓶应不高于 10ng（通则 3407）。

3.1.7 等电点

供试品的主区带应为 9.0～10.0，且供试品的电泳图谱应与对照品的图谱一致（通则 0541 第六法）。

3.1.8 紫外光谱

用水或 0.9% 氯化钠溶液将供试品稀释至 100～500μg/ml.

在光路 lcm、波长 230～360nm 下进行扫描，最大吸收峰波长应为 277nm 士 3nm（通则 0401）。

3.1.9 肽图

依法测定（通则 3405），应与对照品图形一致。

3.2 半成品检定

3.2.1 生物学活性

依法测定（通则 3527），应符合规定：

3.2.2 无菌

依法检查（通则 1101），应符合规定。

3.3 成品检定

3.3.1 鉴别试验

按免疫印迹法（通则 3401）或免疫斑点法（通则 3402）测定，应为阳性。

3.3.2

检查

3.3.2.1 外观

应为尤色澄明液体，不得含有肉眼可见的不溶物。

3.3.2.2 装量

依法检查（通则 0118)，应符合规定。

3.3.2.3 pH 值

应为 6.5～7.5（通则 0631）.

3.3.2.4 无菌

依法检查（通则 1101），应符合规定，

3.3.3 生物学活性

应为标示量的 70%～200%（通则 3527）。

于 2～8℃避光保存和运输。自生产之日起，按批准的有效期执行。

应符合生物制品分包装及贮运管理（通则 0239）规定和批准的内容。